摘要：1.2.7 感官评价参照GB/T37062-2018《水产品感官评价指南》，制定出感官评价标准表。 ...

在国家和地方食药监局的监督抽检中，酸价、过氧化值是食用油检测的关键指标。

ICRP小柱：DionexOnGuardⅡRP型柱，容量为1mL，美国赛默飞世尔科技公司。阳离子混合标准储备液：Ca2+质量浓度为500mg/L，NH4+质量浓度为250mg/L，Mg2+、K+、Na+质量浓度均为200mg/L，Li+质量浓度为50mg/L，美国赛默飞世尔科技公司。

甲基磺酸：纯度不小于99.0%，美国Sigma公司。2 结果与讨论2.1 阴离子分离条件的优化常用的阴离子淋洗液体系主要有碳酸盐和氢氧化物两种。因此选择CS12A型色谱柱作为阳离子分离柱。分别选择淋洗液流量为0.8、1.0、1.2、1.4mL/min进行试验，结果表明，淋洗液流量过大会使系统压力显著增大，各离子的保留时间明显提前，也会降低色谱柱的使用寿命。超纯水制备仪：Milli-Q型，电导率为18.2Mcm，美国密理博公司。

笔者基于双系统离子色谱仪，采用等度淋洗的方式，建立了蓝藻培养液中7种阴离子和6种阳离子同时定量检测的分析方法，方法简便、快速，降低了实验成本。AS11HC型色谱柱用于分离7种阴离子有明显优势，故本实验选择使用AS11HC型色谱柱。结果发现，衍生30min的出峰面积与衍生60min的出峰面积有一定差异，衍生30min时间较短，可能导致衍生不完全，影响含量测定的准确度。

空白、标准品及样品的HPLC色谱图如图1所示。2.2.2 相对校正因子的计算通过研究发现，苏氨酸、谷氨酸、赖氨酸和天冬氨酸在羊肚菌中的含量均较高且较稳定。以Glu为内参物，计算其与其他16种氨基酸的相对校正因子，结果表明，16种氨基酸的相对校正因子RSD1.73%，详见表2。2.2 一测多评方法学考察2.2.1 线性考察精密吸取不同浓度对照品溶液，衍生化处理后注入色谱仪，结果见表1。

相关链接：苏氨酸，邻苯二甲醛，异硫氰酸苯酯，谷氨酸声明：本文所用图片、文字来源《食品工业科技》，版权归原作者所有。但从质控成本角度来看，谷氨酸较其他三种成分价格更加低廉且附近干扰峰较少。

2.2.6 加样回收率试验按1.2.4.6项下进行试验，结果表明，羊肚菌中17种氨基酸的平均回收率在92.42%～101.16%之间，RSD2.0%，说明氨基酸的回收率较好。衍生90min与衍生60min的出峰面积一致，考虑效率问题，选择衍生时间为60min。根据测得的氨基酸的量，计算回收率和RSD值。1.2.6 耐用性考察1.2.6.1 不同色谱柱的考察精确吸取混合标准品溶液，进行衍生化处理后，在Agilent1100高效液相色谱仪，1.2.3的色谱条件下考察依利特HypersilODS2（250mm4.6mm，5m）和AgilentC18（250mm4.6mm，5m）对氨基酸相对校正因子的影响。

采用一测多评法和内标法对羊肚菌中17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的含量进行计算。在前期的色谱条件研究中，考察了衍生时间对17种氨基酸出峰面积的影响。根据QAMS法内参物易得、价廉、有效、稳定的选择原则，本研究最终选择谷氨酸作为内参物进行相对校正因子的计算。由图1可知，在1.2.3色谱条件下，17种氨基酸的峰型良好，干扰较少，分离清晰。

2.2.3 精密度试验按1.2.4.3项下进行试验，结果显示，17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的峰面积RSD（n=6）为0.89%、0.46%、1.08%、0.61%、1.17%、0.31%、0.50%、0.80%、0.80%、1.89%、0.45%、0.52%、0.90%、0.53%、0.88%、0.54%、0.57%，RSD均小于2.0%，表示仪器的精密度良好。1.2.4.6 加样回收率试验精密称量已知含量的羊肚菌样品9份，每份10mg，置于安瓿瓶中，按150%、100%、50%的比例加入标准品，根据1.2.2.1操作后进行衍生化处理，在上述1.2.3的色谱条件下测定。

2.2.5 稳定性试验按1.2.4.5项方法进行测定，结果显示，17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）峰面积的RSD为0.63%、1.48%、0.99%、1.37%、1.03%、1.49%、1.02%、1.41%、0.78%、0.67%、1.32%、1.24%、1.38%、0.75%、1.54%、1.24%、0.75%，RSD均小于2.0%，说明样品供试溶液在24h内稳定。2 结果与分析2.1 标准品、样品及空白色谱图在前期研究中，最初选择邻苯二甲醛为柱前衍生试剂，但衍生产物不稳定，实验的重现性较差。

1.2.7 不同地区羊肚菌的测定精密称量6个不同地区的羊肚菌，按1.2.2.1方法制备样品供试溶液，进行衍生化处理，按1.2.3色谱条件进样分析，采用一测多评法对氨基酸进行含量计算。1.2.4.4 重复性试验吸取6份平行羊肚菌样品供试溶液，进行衍生化处理，按上述的色谱条件进样测定，记录17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的峰面积，计算RSD值以考察实验的重复性。2.2.4 重复性试验按1.2.4.4项方法进行测定，结果显示，17种氨基酸峰（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）面积的RSD为0.56%、1.72%、1.87%、0.42%、1.53%、1.85%、1.49%、0.80%、0.93%、1.68%、0.60%、1.17%、0.92%、1.48%、0.77%、0.96%、1.65%，RSD均小于2.0%，表明该方法具有较好的重复性。1.2.4.5 稳定性试验取样品供试溶液，衍生化后，于0、2、4、8、16、24h进样分析，记录17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的峰面积，计算RSD值以评价样品的稳定性。1.2.5 样品含量的测定平行取3份云南羊肚菌样品溶液，进行衍生化处理，按上述的色谱条件测定。由表1可知，17种氨基酸在线性范围内与峰面积呈现良好的线性关系，相关系数R2＞0.9990

2.2.6 加样回收率试验按1.2.4.6项下进行试验，结果表明，羊肚菌中17种氨基酸的平均回收率在92.42%～101.16%之间，RSD2.0%，说明氨基酸的回收率较好。1.2.6 耐用性考察1.2.6.1 不同色谱柱的考察精确吸取混合标准品溶液，进行衍生化处理后，在Agilent1100高效液相色谱仪，1.2.3的色谱条件下考察依利特HypersilODS2（250mm4.6mm，5m）和AgilentC18（250mm4.6mm，5m）对氨基酸相对校正因子的影响。

2.2.3 精密度试验按1.2.4.3项下进行试验，结果显示，17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的峰面积RSD（n=6）为0.89%、0.46%、1.08%、0.61%、1.17%、0.31%、0.50%、0.80%、0.80%、1.89%、0.45%、0.52%、0.90%、0.53%、0.88%、0.54%、0.57%，RSD均小于2.0%，表示仪器的精密度良好。2.2.4 重复性试验按1.2.4.4项方法进行测定，结果显示，17种氨基酸峰（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）面积的RSD为0.56%、1.72%、1.87%、0.42%、1.53%、1.85%、1.49%、0.80%、0.93%、1.68%、0.60%、1.17%、0.92%、1.48%、0.77%、0.96%、1.65%，RSD均小于2.0%，表明该方法具有较好的重复性。

2.2 一测多评方法学考察2.2.1 线性考察精密吸取不同浓度对照品溶液，衍生化处理后注入色谱仪，结果见表1。1.2.4.5 稳定性试验取样品供试溶液，衍生化后，于0、2、4、8、16、24h进样分析，记录17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的峰面积，计算RSD值以评价样品的稳定性。

根据测得的氨基酸的量，计算回收率和RSD值。1.2.4.4 重复性试验吸取6份平行羊肚菌样品供试溶液，进行衍生化处理，按上述的色谱条件进样测定，记录17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的峰面积，计算RSD值以考察实验的重复性。由图1可知，在1.2.3色谱条件下，17种氨基酸的峰型良好，干扰较少，分离清晰。2.2.2 相对校正因子的计算通过研究发现，苏氨酸、谷氨酸、赖氨酸和天冬氨酸在羊肚菌中的含量均较高且较稳定。

在文献调研后，选择了异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂，其反应条件温和、衍生产物性质稳定，重复性好。1.2.4.6 加样回收率试验精密称量已知含量的羊肚菌样品9份，每份10mg，置于安瓿瓶中，按150%、100%、50%的比例加入标准品，根据1.2.2.1操作后进行衍生化处理，在上述1.2.3的色谱条件下测定。

1.3 数据处理应用IBMSPSSStatistics26.0软件进行t检验，实验谱图Originpro9.1处理。空白、标准品及样品的HPLC色谱图如图1所示。

2 结果与分析2.1 标准品、样品及空白色谱图在前期研究中，最初选择邻苯二甲醛为柱前衍生试剂，但衍生产物不稳定，实验的重现性较差。相关链接：苏氨酸，邻苯二甲醛，异硫氰酸苯酯，谷氨酸声明：本文所用图片、文字来源《食品工业科技》，版权归原作者所有。

1.2.6.2 不同仪器的考察精密吸取混合对照品溶液，进行衍生化处理后，采用依利特HypersilODS2（250mm4.6mm，5m）在1.2.3色谱条件下，考察两台不同色谱仪Agilent1100HPLC、Agilent1260HPLC对氨基酸相对校正因子的影响。1.2.5 样品含量的测定平行取3份云南羊肚菌样品溶液，进行衍生化处理，按上述的色谱条件测定。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。但从质控成本角度来看，谷氨酸较其他三种成分价格更加低廉且附近干扰峰较少。

衍生90min与衍生60min的出峰面积一致，考虑效率问题，选择衍生时间为60min。由表1可知，17种氨基酸在线性范围内与峰面积呈现良好的线性关系，相关系数R2＞0.9990。

以Glu为内参物，计算其与其他16种氨基酸的相对校正因子，结果表明，16种氨基酸的相对校正因子RSD1.73%，详见表2。采用一测多评法和内标法对羊肚菌中17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的含量进行计算。

结果发现，衍生30min的出峰面积与衍生60min的出峰面积有一定差异，衍生30min时间较短，可能导致衍生不完全，影响含量测定的准确度。2.2.5 稳定性试验按1.2.4.5项方法进行测定，结果显示，17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）峰面积的RSD为0.63%、1.48%、0.99%、1.37%、1.03%、1.49%、1.02%、1.41%、0.78%、0.67%、1.32%、1.24%、1.38%、0.75%、1.54%、1.24%、0.75%，RSD均小于2.0%，说明样品供试溶液在24h内稳定。